72大岩桐SPY同源基因的克隆及其功用研讨钟丹，姜仕豪，胡立霞，韩雪，庞基良( 杭州师范大学生命与环境科学学院，杭州310036)大岩桐是苦茂苔科的一种日中性植物，开花无需春化效果，从播种到开花仅需3—4个月。咱们在曾经的研讨中发现赤霉素和细胞分裂素能协同促进离体培育的人岩桐花被直接再生花芽。由大岩桐的特性及花被再生花芽的特色来看，以大岩桐花被切块再生花系统研讨GA在花芽分化中的分子机制，可简化外因的影响，便于展开单因子实验。SPINDLY( SPy) 是赤霉素信号转导的负调控因子，一起又是细胞分裂素信号转导的正调控因子。为了进一步讨论艘y在火岩桐花芽分化...

  72大岩桐SPY同源基因的克隆及其功用研讨钟丹，姜仕豪，胡立霞，韩雪，庞基良( 杭州师范大学生命与环境科学学院，杭州310036)大岩桐是苦茂苔科的一种日中性植物，开花无需春化效果，从播种到开花仅需34个月。咱们在曾经的研讨中发现赤霉素和细胞分裂素能协同促进离体培育的人岩桐花被直接再生花芽。由大岩桐的特性及花被再生花芽的特色来看，以大岩桐花被切块再生花系统研讨GA在花芽分化中的分子机制，可简化外因的影响，便于展开单因子实验。SPINDLY( SPy) 是赤霉素信号转导的负调控因子，一起又是细胞分裂素信号转导的正调控因子。为了进一步讨论艘y在火岩桐花芽分化中的效果，咱们使用RACE办法克隆了大岩桐sPy的同源基因，并对其功用进行了开始研讨。首要研讨结果如下：1．比较多个物种的SPy基冈序列，依据相对保存的核茴酸序列规划引物，使用RACE技能从大岩桐中克隆剑了艘瞎冈的全长cDNA，并命名为SsSPY, 在Genbank中登录号为：EU878416。序列剖析标明，该基因包括一个完好的ORF，长度为2805bp，编码934个氨基酸。N端为l O个重复的TPR结构。与矮牵牛的PhSPY基因、拟南芥的SPY基冈同源性最高，分别为80％、76％。蛋白质同源性剖析也标明其与SPY类基因具有进化上的相关性。2．经过RT-PCR对该基因的表达进行了剖析，发现跚尸】，基因在大岩桐的根、茎、叶和花芽中均有表达。结合拟南芥中SPY的表达部位，阐明SsSPY可能在植物的整个生命周期都起到了效果。3．使用Smal ／Sacl 和Xbal ／Sael 双酶切，成功构建了植物表达载体pBl l 21一SPY和pBl l 21一TPR，并转化农杆菌GV3101和EHAl 05。4．对大岩桐的Kan挑选压进行了判定，确认其适宜的挑选压为30mgn。。使用农杆菌介导法，将表达载体pBl l 21．SPY和pBl l 21-TPR转化大岩桐，取得转基因植株。经PCR检测，其转化功率分别为22．22％和11．1l ％。5．使用农杆菌介导，将表达载体pBl l 21一SPY和pBl l 2I-TPR转化烟草，取得转基因植株。经PCR和RT-PCR检测，其转化功率分别为95．65％和100％，而且根本都能表达。经过表趔剖析发现，转基因植株与野生型比较株型更高、节问变长、花期提早、分枝增多。基金项目：国家自然科学基金项目(31071818)；杭州市科学技能局项目(20070232H08)： 通讯作者Author for correspondence(Emai l ：pangrenshui l i ．cn)55